1. Метод кислотного осаждения и щелочной экстракции.
Это традиционный метод разделения и экстракции. В этом методе используется особенность, заключающаяся в том, что большинство белков соевых бобов осаждаются в изоэлектрической точке (рН 415), чтобы отделить их от других компонентов. Осажденные белки растворяются после корректировки pH, поэтому это называется кислотным осаждением и щелочной экстракцией. Недостатками кислотного осаждения и экстракции щелочей являются: большой расход кислоты и щелочи, высокие затраты на очистку сточных вод, низкий выход продукта. Этот метод разделения и экстракции нуждается в усовершенствовании. Но это по-прежнему основной метод промышленного производства.
2. Мембранный метод разделения.
В зависимости от молекулярной массы и формы соевого белка, а также адаптируемости мембраны к соевому белку выбираются мембранные материалы и мембраны с различными пороговыми значениями молекулярной массы. Экстракт соевого белка отделяют ультрафильтрацией и очищают ультрафильтрацией для удаления неотсеиваемых компонентов и соответствия стандартам. Отделенную жидкость соевого белка затем ультрафильтруют и концентрируют до необходимой концентрации, затем выгружают и сушат распылением с получением порошкообразного изолята соевого белка.
3. Метод обратной экстракции и разделения мицелл.
Обратные мицеллы представляют собой агрегаты, образованные поверхностно-активными веществами в органических растворителях. Неполярный хвост ПАВ находится снаружи и контактирует с органическим растворителем. Полярная головка находится внутри и образует полярное ядро. Ядро обладает способностью содержать водный раствор. И способность растворять белки, поэтому этот органический растворитель, содержащий обратные мицеллы, можно использовать для извлечения белков из водной фазы. Используя технологию обратной мицеллы для извлечения соевого белка из полножирной соевой муки, за один раз можно извлечь около 50%. Процесс экстракции соевого белка очень быстрый, и для его объяснения разумнее использовать недиффузионную модель.
Основными инструментами, необходимыми для этого метода, являются: автоматический анализатор влажности, генератор постоянной температуры в газовой бане, центрифуга, анализатор азота Кьельдаля, аналитические весы, магнитная мешалка с постоянной температурой, микроинжекторный стержень и т. д.
К основным факторам, влияющим на процесс обратной мицеллоэкстракции, относятся тип и концентрация ПАВ, значение pH водной фазы, ионная сила, температура и др.
4. Обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография.
Это метод быстрого разделения 7S и 11S глобулинов в соевом белке. При условиях разделения 40°C и скорости потока 1 мл/мин разделение соответствующего глобулина может быть завершено за 9 минут. Конкретные методы:
(1) Реагенты и образцы. Для приготовления подвижной фазы использовали ацетонитрил (CAN) (чистость для ВЭЖХ), трифторуксусную кислоту (ТФУ) (чистость для ВЭЖХ) и воду для чистоты для ВЭЖХ. Для выделения соевого белка использовали трис (триметиламинометановый буфер) и 2-меркаптоэтанол (ч.д.а.). Образцы изолята соевого белка могут представлять собой текстурированный белок, соевую муку, соевое молоко и обогащенную детскую сою, а содержание белка в них определяется перед использованием. Образец растворяли в воде, а затем перед инъекцией фильтровали через стерильную полифенольную фильтровальную бумагу с размером пор 0,122 мкм. Все образцы и стандарты хранили при температуре 3°C или замораживали. Растворы проб готовили свежими в день анализа и хранили на льду для последующего использования.
11 S и 7 S глицинин отделяли в соответствующих изоэлектрических точках (pH 614 и pH 418) в осадках.
(2) Высокоэффективная жидкостная хроматография. Хроматограф Hewlett-Packard 1090 II с диодным умножителем и системой детектирования данных HP 9153C, 20 мкл на инъекцию. Разделение проводили на колонке PLRP-S (150 мм × 416 мм внутренний диаметр), заполненной частицами полистирол-дивинилбензола (300!, 8 мкм), время пребывания на колонке (117 мин) использовали для пропускания неадсорбированных моча. Измеряли пиримидины, а белки измеряли по УФ-поглощению при 254 нм. Медленноподвижная фаза А представляет собой 0,11% водный раствор трифторуксусной кислоты (ТФУ); быстрая подвижная фаза Б представляет собой 011% раствор ТФУ в ацетонитриле. Подвижную фазу фильтровали через нейлоновый фильтр с размером пор 0145 мкм и откачивали небольшим количеством азота.